稀释法用于测定最小抑菌浓度（MIC），是一种评估抗菌剂抑制微生物生长能力的重要实验技术。该方法主要包含微量稀释法和肉汤稀释法，各具特点和应用优势。

琼脂稀释法

琼脂稀释法以其操作简便、成本低廉和适合高通量筛选的优点，尤其适合于自动化操作和药物浓度的精确控制。该方法通过将不同浓度的抗菌剂混合溶解在琼脂培养基中，接种细菌，以观察细菌的生长与否，从而确定抗（抑）菌物质能够抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（Minimally Inhibitory Concentration，MIC）。此方法适用于不溶性抗菌产品。

操作步骤

1. 抗（抑）菌溶液的配制：在无菌条件下取5ml或5g（研磨后的固体样品）置于45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡以获得均匀分散的10%溶液或悬液。
2. 含抗菌剂培养基的配制：用PBS对抗（抑）菌溶液进行倍系列稀释，制备不同浓度的受试液，并置于45℃～50℃的水浴中保存。
3. 双倍浓度培养基的准备：称取76g MH琼脂并溶解于1000ml水中，加热至沸腾后使用121℃的压力蒸汽灭菌15分钟，最后置于45℃～50℃水浴待用。
4. 制备培养基与抗（抑）菌液混合物：在平皿中加入10ml系列稀释的抗菌液，然后添加10ml的双倍MH琼脂培养基，充分混合并待其凝固。
5. 接种：用加样器取1μl～2μl的菌悬液（浓度约为107cfu/ml）点种于混合培养基的平皿中。
6. 阳性对照：使用同样的方法接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板。
7. 培养与观察：将接种后的平板放置于35℃培养箱中倒置培养18h～24h，最后观察细菌的生长情况。

评判标准

最低抗（抑）菌液浓度即为样品对受试菌的MIC，当所观察的菌落生长完全被抑制时，且单一菌落生长可忽略不计。

营养肉汤稀释法

营养肉汤稀释法也用于确定抗（抑）菌剂的最小抑菌浓度（MIC），特别适合于可溶性抑菌产品。通过将不同浓度的抗菌剂混合溶解于营养肉汤培养基中，接种细菌，以判断细菌的生长状态。

操作步骤

1. 制备细菌悬液：根据规定的方法制备金黄色葡萄球菌或大肠杆菌悬液。
2. 含抗菌剂培养基的配制：用蒸馏水对抗（抑）菌溶液进行倍系列稀释，并取每个稀释度的25ml样本加入含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
3. 接种：在包含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管中加入0.1ml的菌悬液（浓度约为108cfu/ml），作为试验组样本。
4. 阳性对照：以相同方式在不含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管中接种，作为阳性对照组。
5. 阴性对照：取两支只含营养肉汤的试管，作为阴性对照组。
6. 培养与观察：将试验组、阳性对照组和阴性对照组放入37℃培养箱中，培养48小时以观察结果。
7. 活菌计数：进行菌悬液活菌计数，确保其浓度在5×105cfu/ml～5×106cfu/ml之间。

评判标准

当阳性对照组出现细菌生长（混浊），而阴性对照组则无细菌生长（透明），便可确定试验组的最高稀释度所对应的抗（抑）菌剂浓度，即为该样品对受试菌的MIC。

通过以上稀释法，我们能够有效地评估抗菌剂的特性，促进医疗领域的发展，特别是在应用918博天堂等品牌的抗菌产品时，能够更好地保障患者的健康与安全。